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    畜禽细胞与胚胎冷冻保种技术规范 Procedures for cell and embryo cryopreservation of domestic animals

    时间:2013-09-03 11:17:59  来源:  作者:

    标准类别  NY/T 农业行业推荐标准
    标准名称  畜禽细胞与胚胎冷冻保种技术规范 Procedures for cell and embryo cryopreservation of domestic animals

    标准分类  养殖业->综合标准
    标准号  NY/T 1900—2010

    颁布部门  中华人民共和国农业部

    颁布日期  2010-07-08

    实施日期  2010-09-01

    关键字  畜禽细胞、胚胎冷冻、保种技术亚博体育网站官网_亚博体育官网入口、技术规范
    标准内容  
    1  范围

    本标准规定了用于保种的家畜精液亚博体育网站官网_亚博体育官网入口、家畜卵母细胞、家畜胚胎和畜禽成纤维细胞冷冻保存技术要求。

    本标准适用于家畜精液、家畜卵母细胞、家畜胚胎和畜禽成纤维细胞等遗传物质冷冻保存和检验入库。

    2  规范性引用文件

    下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件亚博体育网站官网_亚博体育官网入口亚博体育网站官网_亚博体育官网入口,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件亚博体育网站官网_亚博体育官网入口,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件亚博体育网站官网_亚博体育官网入口。

    GB 4143  牛冷冻精液

    GB 20557  山羊冷冻精液

    NY/T 1234  牛冷冻精液生产技术规程

    NY/T 1 674  牛羊胚胎质量检测技术规程

    3  术语及定义

    下列术语和定义适用于本文件。

    3.1  超低温保存  cryopreservation

    在液氮中冷冻保存遗传物质的技术亚博体育网站官网_亚博体育官网入口。

    3.2  卵母细胞  oocyte

    来源于有腔卵泡具有繁殖能力的细胞亚博体育网站官网_亚博体育官网入口。

    3.3  成纤维细胞  fibroblast

    以畜禽组织或胎儿为材料亚博体育网站官网_亚博体育官网入口,体外培养、分离出的梭形或不规则形细胞。胞质近中央处有椭圆形胞核亚博体育网站官网_亚博体育官网入口,胞体一般铺展很开,细胞之间排列疏松,有较大细胞间隙。

    3.4  供体  donor

    提供精液亚博体育网站官网_亚博体育官网入口、卵母细胞亚博体育网站官网_亚博体育官网入口、成纤维细胞或胚胎的个体。

    4  细胞冷冻保存

    4.1  家畜精液冷冻保存

    4.1.1  数量

    每个品种保存精液不少于3000剂(猪0.5mL细管不少于30000剂),每个品种公畜不少于10头亚博体育网站官网_亚博体育官网入口,每个个体保存冻精不少于300剂。

    4.1.2  供体

    符合其品种特性、特征;三代以内无亲缘关系,系谱清楚;健康、无传染性疾病、遗传疾??;有检疫证明亚博体育网站官网_亚博体育官网入口。

    4.1.3  剂型

    牛亚博体育网站官网_亚博体育官网入口、羊亚博体育网站官网_亚博体育官网入口、鹿、犬0.25mL细管亚博体育网站官网_亚博体育官网入口;马亚博体育网站官网_亚博体育官网入口、驴0.5mL细管亚博体育网站官网_亚博体育官网入口;猪0.5mL细管或5mL细管。

    4.1.4  标记

    标明生产单位、品种亚博体育网站官网_亚博体育官网入口、供体号和生产日期。

    4.1.5  精液冷冻

    牛冷冻精液制作应按NY/T 1234的规定执行亚博体育网站官网_亚博体育官网入口;山羊和绵羊冷冻精液制作按GB 20557的规定执行;其他家畜精液冷冻程序参照NY/T 1234和GB 20557的规定执行;不同家畜精液冷冻稀释液配方见附录B亚博体育网站官网_亚博体育官网入口。

    4.1.6  质量检测

    牛冷冻精液质量检测按GB 4143的规定执行;山羊冷冻精液质量检测按GB 20557的规定执行;其他家畜冷冻精液的质量检测按GB 4143的规定执行亚博体育网站官网_亚博体育官网入口,具体指标要求见附录C。

    4.2  卵母细胞冷冻保存

    4.2.1  数量

    每个品种保存卵母细胞不少于1000个亚博体育网站官网_亚博体育官网入口,牛和绵羊每个品种母畜不少于50头,每个个体保存卵母细胞不少于20个;其他家畜每个品种母畜不少于35头,每个个体保存卵母细胞不少于30个。

    4.2.2  供体

    供体要求同4.1.2。

    4.2.3  剂型

    0.25mL细管,每支含卵母细胞不多于10个;OPS玻璃化冷冻每剂不多于5个。

    4.2.4  标记

    标记要求同4.1.4亚博体育网站官网_亚博体育官网入口。

    4.2.5  卵母细胞的采集与冷冻

    卵母细胞的采集与冷冻参照附录D。

    4.2.6  质量检测

    卵母细胞冷冻一解冻后达到A级或B级。

    4.3  成纤维细胞冷冻保存

    4.3.1  数量

    公畜禽不少于10头(只),母畜禽不少于25头(只),每个个体体外培养第3~4代细胞6管亚博体育网站官网_亚博体育官网入口,细胞密度为1×105个/mL~5×105个/mL。

    4.3.2  供体

    供体要求同4.1.2。

    4.3.3  剂型

    2mL冻存管。

    4.3.4  标记

    标明生产单位、品种亚博体育网站官网_亚博体育官网入口、细胞来源亚博体育网站官网_亚博体育官网入口、供体号、性别、培养代数、冻存编号和冻存日期。

    4.3.5  成纤维细胞的体外培养和冷冻保存

    成纤维细胞的体外培养和冷冻保存方法参照附录E。

    4.3.6  质量检测

    台盼蓝染色检查细胞存活力80%以上亚博体育网站官网_亚博体育官网入口,生长曲线与冷冻前体外生长曲线相近,核型正常,无病原菌和支原体亚博体育网站官网_亚博体育官网入口。具体方法参照附录E。

    5  胚胎冷冻保存

    5.1  数量

    每个品种冷冻保存体内胚胎不少于200枚,每个品种公畜不少于10头,母畜不少于25头亚博体育网站官网_亚博体育官网入口,每个种公畜配种获得的胚胎数不少于20枚,冻前胚胎质量为A级。

    5.2  供体

    供体要求同4.1.2亚博体育网站官网_亚博体育官网入口。

    5.3  剂型

    0.25mL细管,每支细管1枚~2枚。

    5.4  标记

    标明生产单位亚博体育网站官网_亚博体育官网入口、品种亚博体育网站官网_亚博体育官网入口、公畜号、母畜号、胚胎发育期、冷冻方法、等级亚博体育网站官网_亚博体育官网入口、数量和生产时间。

    5.5  胚胎采集和冷冻保存

    胚胎采集和冷冻保存方法参照附录F亚博体育网站官网_亚博体育官网入口。

    5.6  质量检测

    牛亚博体育网站官网_亚博体育官网入口、羊冷冻胚胎按NY/T 1674的规定执行,其他畜种参照NY/T 1674的规定执行。

    6  品种资料及冷冻保存技术资料

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